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我們?cè)谑褂猛關(guān)CR八聯(lián)管試劑盒是需要清洗的，有一些凈化PCR八聯(lián)管清洗套件的方法，在使用過(guò)程中需要注意的內(nèi)容有哪些?

實(shí)驗(yàn)方法原理：硅膠膜在高鹽條件下結(jié)合DNA，可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物，單核苷酸，酶，礦物油，鹽離子等被分離，因?yàn)樗鼈兣cDNA沒(méi)有相似的性質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)材料：PCR產(chǎn)物，試劑，試劑盒，PCR清潔套件，儀器，消耗品，96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V形板。

一、PCR八聯(lián)管廠家談試劑盒的組成，儲(chǔ)存，穩(wěn)定性

1、說(shuō)明書(shū)，消耗品：96孔DNA制備板，96孔1.6ml深孔板，96孔V形板。

2、緩沖液PCR-A：DNA結(jié)合溶液。在室溫下以密封狀態(tài)儲(chǔ)存。如果發(fā)生沉淀，應(yīng)將其溶解在65°C的溫浴中，并在使用前冷卻至室溫。

3、緩沖液W2濃縮液：除去鹽溶液。使用前，根據(jù)瓶子上指定的體積加入乙醇，充分混合，并在室溫下保存?？梢允褂?00%乙醇或95%無(wú)水乙醇。

4.洗脫液：2.5mM Tris-HCl，pH 8.5，在室溫下以密封狀態(tài)儲(chǔ)存。

二、PCR八聯(lián)管廠家談操作步驟

用戶(hù)可以選擇負(fù)壓或離心。

A.負(fù)壓法

1、正確連接負(fù)壓裝置，將96孔DNA制備板放在負(fù)壓裝置上;在PCR，酶消化，酶標(biāo)記或測(cè)序反應(yīng)溶液中加入3倍緩沖液PCR-A(如果緩沖液PCR-A小于100μl，加入100μl);充分混合并轉(zhuǎn)移至96孔DNA制備板，打開(kāi)并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30英寸汞柱，并緩慢吸出板中的溶液。

2、加入0.3 ml緩沖液W2并吸收溶液。用相同的方法用0.3ml緩沖液W2洗滌兩次。確認(rèn)在試劑瓶上的指定體積的緩沖液W2濃縮物中加入無(wú)水乙醇。

3、維持負(fù)壓并提取96孔DNA制備板10分鐘。

4、在長(zhǎng)纖維組織上將96孔DNA制備板粉碎6次，引流管朝下。

5、將96孔DNA制備板置于96孔V形板上，加入25-30ul水或洗脫至膜中心，在室溫下靜置1分鐘。通過(guò)以3 000×g離心5分鐘洗脫DNA。

B.離心

1、在PCR，消化，酶標(biāo)記或測(cè)序反應(yīng)中加入3倍體積的Buffer PCR-A(如果Buffer PCR-A小于100μl，加100μl);混合并轉(zhuǎn)移到制備板96孔中的96孔DNA中。將DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，以1000×g離心1分鐘，棄去濾液。

2、在96孔DNA制備板中，加入0.3ml緩沖液W2，以1000×g離心1分鐘，棄去濾液。用0.3ml緩沖液W2以相同方式再次洗滌。確認(rèn)在試劑瓶上的指定體積的緩沖液W2濃縮物中加入無(wú)水乙醇。

3、將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，并以3 000×g離心10分鐘。

4、將96孔DNA制備板置于干凈的96孔V形底板中，加入25-30ul水或洗脫至膜中心，在室溫下靜置1分鐘。通過(guò)以3 000×g離心5分鐘洗脫DNA。

PCR八聯(lián)管廠家談注意事項(xiàng)：

1、將洗脫液或水加熱至65°C有助于提高洗脫效率。

2、DNA分子是酸性的，建議儲(chǔ)存在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5洗脫液中。